Эмиссия газов от очистных сооружений канализации: В последние годы внимание мирового сообщества сосредоточено на экологических проблемах...
Кормораздатчик мобильный электрифицированный: схема и процесс работы устройства...
Топ:
История развития методов оптимизации: теорема Куна-Таккера, метод Лагранжа, роль выпуклости в оптимизации...
Определение места расположения распределительного центра: Фирма реализует продукцию на рынках сбыта и имеет постоянных поставщиков в разных регионах. Увеличение объема продаж...
Основы обеспечения единства измерений: Обеспечение единства измерений - деятельность метрологических служб, направленная на достижение...
Интересное:
Аура как энергетическое поле: многослойную ауру человека можно представить себе подобным...
Отражение на счетах бухгалтерского учета процесса приобретения: Процесс заготовления представляет систему экономических событий, включающих приобретение организацией у поставщиков сырья...
Распространение рака на другие отдаленные от желудка органы: Характерных симптомов рака желудка не существует. Выраженные симптомы появляются, когда опухоль...
Дисциплины:
2017-09-30 | 363 |
5.00
из
|
Заказать работу |
|
|
Ингредиенты реакции: исследуемая сыворотка для выявления антител к поверхностным антигенам (гликопротеинам) ВИЧ,лунки планшеток с сорбированным ВИЧ антигеном , антиглобулиновая сыворотка, меченная ферментом (пероксидазой хрена) и субстрат/хромоген для фермента (перекись водорода + ортофенилендиамин — ОФД)
Постановка ИФА: В лунки планшетокс сорбированным ВИЧ антигеном добавляют исследуемую сыворотку больного. Выдерживают 60 мин. при комнатной температуре и промывают каждую лунку буферным раствором для удаления несвязанных компонентов. В каждую лунку вносят антиглобулиновую сыворотку, меченную ферментом (пероксидазой хрена). Выдерживают 60 мин при комнатной температуре и промывают каждую лунку буферным раствором для удаления несвязанных компонентов. Затем добавляют субстрат/хромоген для фермента (перекись водорода + ортофенилендиамин — ОФД).
Учёт ИФА. При образовании комплекса + + , субстрат (перекись водорода) расщепляется ферментом (пероксидазой хрена) на конечные продукты кислород и воду. В присутствии кислорода индикатор (ОФД) изменяет цвет продукта реакции — с бесцветного на желто-коричневый. Интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител. Определяют оптическую плотность содержимого каждой лунки (контрольных и рабочих) с помощью фотоколориметра.
1. Определение специфичности контролей: контроли специфичны, если
ОП «+» контролей >1, а ОП «-»<0,2.
2. Расчет ОП критической
ОП крит. = ср. знач. ОП К- + 0,200
где ОП крит.- критическое значение оптической плотности; ср. знач. ОП К--- среднее значение оптической плотности отрицательных контролей; 0,200 — коэффициент, устанавливаемый методом статистической обработки результатов на предприятии-изготовителе тест-системы.
|
3. Определение результата реакции:
результат положительный, если ОП рабочей лунки > ОП крит.,
результат отрицательный, если ОП рабочей лунки < ОП крит.
Заключение: Например, контроли специфичны и результат положительный, следовательно, в исследуемой сыворотке содержатся антитела к ВИЧ.
Зарисовать схему молекулярной гибридизации (МГ)
Метод молекулярной гибридизации ДНК-ДНК используется для установления геномного родства в пределах рода и семейств микроорганизмов; РНК-ДНК на уровне порядка. Степень сходства или гомологичность последовательностей ДНК выражается процентом (%) гомологии и является мерой геномного родства микроорганизмов.
Схема точечной гибридизации
Недостаток метода — короткий период полураспада фосфора и наличие специфического оборудования.
Блот-гибридизация
Метод выявления фрагментов ДНК, разделенных электрофорезом в агарозе. ДНК предварительно нарезается с помощью рестрикционных эндонуклеаз из суммарной ДНК. Перенос фрагментов ДНК на нитроцеллюлозные фильтры и обработка мечеными зондами.
|
Гибридизация in situ
Позволяет выявить нуклеиновые кислоты в инфицированных клетках. Клетки, после денатурации нуклеиновой кислоты, обрабатываются немечеными зондами, формирующими гибридные двунитчатые структуры, затем обработка меченой флюорохромом сывороткой к гибридомам. При наличии в материале незначительных количеств нуклеиновой кислоты вирусов применяется ПЦР.
|
|
Историки об Елизавете Петровне: Елизавета попала между двумя встречными культурными течениями, воспитывалась среди новых европейских веяний и преданий...
Общие условия выбора системы дренажа: Система дренажа выбирается в зависимости от характера защищаемого...
История создания датчика движения: Первый прибор для обнаружения движения был изобретен немецким физиком Генрихом Герцем...
Двойное оплодотворение у цветковых растений: Оплодотворение - это процесс слияния мужской и женской половых клеток с образованием зиготы...
© cyberpedia.su 2017-2024 - Не является автором материалов. Исключительное право сохранено за автором текста.
Если вы не хотите, чтобы данный материал был у нас на сайте, перейдите по ссылке: Нарушение авторских прав. Мы поможем в написании вашей работы!