Методы иммунологического анализа.

Методы клинико-иммунолгических исследований разделяются на методы оценки естественого клеточного и гуморального антигенспецифического иммунитета. Основной объект анализов – кровь (клеточные компоненты, сыворотка).

∆ Для выявления в периф крови Т- и В-лф исп-ся моноклональные антитела(МАТ). Для регистрации вз/д клетка–МАТ необходима метка (1.флуорохромы– иммунофлуоресцентный метод: производится учет клеток, имеющих кольцевое или точечное свечение на люминесцентном микроскопе или проточном цитометре. 2. ферменты – иммуноферментный анализ: для определения концентрации растворимых молекул).

∆Ранее состояние комплемента оценивали с использованием громоздкой гемолитической системы, позвол. получить суммарное представление об активности системы комплемента. В настоящее время доступно определение индивид. факторов комплемента методом ИФА с исользованием МАТ.

∆Оценка фагоцитирующих клеток (нейтрофилов), N 40-90%: опред. фагоцит. индекс и фагоцит. число; в качестве объекта фагоцитоза – St. aureus, зимозан, дрожжи, частицы латекса. ↑: восп процесс. ↓: хронизация воспал процесса и поддержание аутоиммунного процесса. *НСТ (нитросиний тетразоль добавляют к фагоцитирующим клеткам + объект →НСТ превращается в темно-синие гранулы (т.к. выраб активные формы кислорода) *Определяют адгезию клеток *Хемотаксис под агарозой. *Лизосомально-катионный тест 1,08-1,38 у.е.Хар-т степень активности кислороднезависимых микробицидных систем фагоцитв. Основан на цитохимическом выявлении неферментных лизосомально-катионных белков, относительное содержание которых в исследуемых клетках позволяет судить о представительстве названных антимикробных систем. ↑ при коллагенозах, аутоиммунном хр, вирусном гепатитах, циррозе печени.

∆Для определения активности NK-клеток используют: *определение их содержания в переферической крови с помощью иммунофенотипирования с СД16 и СД 56 (лимфоцитотоксический тест, иммунофлуоресценция, проточная цитофлуорометрия).*регистрация пролиферации под действием миним. концентрации зкзогенного ИЛ-2 в течение первых 12 часов культивирования. * определение цитотоксической активности NK по их способности лизировать клетки -мишени (инфицированные вирусами, опухолевые или аллогенные клетки). Чаще используют линии клеток миелоидного лейкоза К-562. Разновидности методов: 1. радиоизотопный с использованием меченого Cr⁵¹ уридина, рассчитывают количество лизированных клеток. 2. использование камер Перфильева.

В – клеточное звено иммунитета (г уморальный иммунитет)

Определение факторов гуморального иммунитета включает подсчет В-лф в переф. крови, определение концентрации Ig основных классов, а в особых случаях субклассов IgG. Адекватными тестами на В-лф является их цитофлуорометрическое определение с использованием ПАТ и МАТ к СД-19, 20, 21. Концентрацию Ig, а также типы легких цепей обычно опрделяют методом радиальной иммунодиффузии по Манчини с использованием поликлональных антител. Вособых случаях используют ИФА и МАТ.

∆Функциональную активность клеток определяют пролиферативные тесты: отражают способность различных популяций лф к вступлению в митотический цикл после воздействия индуктора (митогена), активатором для Т-лф является фитогемагглютинин (ФГА), для В-лф - бактериальный липополисахарид. Иногда клетки тестируют на сособность к ответу на митоген лаконоса(ответ осуществляют В-лф при участии Т-хелперов–индукция тимусзависимого гуморального ответа. При всех вариантах митогенной стимуляции регистрируется пролиферативный ответ клеток (радиометрически–по включению ³Н-тимидина) *МТТ-тест, МТТ добавляют в культуру живых клеток. Тест основан на изменении цвета красителя из синего в желтый. Регистрируют цитофотометрически. *использование цитофлуорометрической метки-йодида пропидия.

∆Оценка цитокинсинтезирующей и цитокинсекретирующей способности лф: учет результатов–ИФА либо по степени пролиферации клеток, размножение которых зависит от искомого цитокина

Новейшие методы: МНС-типирование, ПЦР.

Т-л (Е-РОК) N=58-67%; 0,9-1,2 *10⁹/л Сниж-ся восп процесс еще до начала клиники, онкология, торпидное течение хр заб. Резкое повышение – лимфолейкоз.

Т-л активный (Е-РОК) N=24-50%; 0,4-0,8 *10⁹/л

Т-х (CD4+) N=33-46%; 0,6-0,8 *10⁹/л Разница м/ду Е-РОК при 4^оС и. Е-РОК при 29^оС – Т-с (CD8+) N=17-30%; 0,27-0,55 *10⁹/л Т-х пов, Т-с сниж – восп, а ллергич, аутоиммунные процессы; сниж Т-х, увел Т-с – СПИД, ИРИ мен 1. Умень Т-х – сепсис, хр вялотекущий процесс