История создания датчика движения: Первый прибор для обнаружения движения был изобретен немецким физиком Генрихом Герцем...
Двойное оплодотворение у цветковых растений: Оплодотворение - это процесс слияния мужской и женской половых клеток с образованием зиготы...
Топ:
Оснащения врачебно-сестринской бригады.
Техника безопасности при работе на пароконвектомате: К обслуживанию пароконвектомата допускаются лица, прошедшие технический минимум по эксплуатации оборудования...
Характеристика АТП и сварочно-жестяницкого участка: Транспорт в настоящее время является одной из важнейших отраслей народного...
Интересное:
Распространение рака на другие отдаленные от желудка органы: Характерных симптомов рака желудка не существует. Выраженные симптомы появляются, когда опухоль...
Что нужно делать при лейкемии: Прежде всего, необходимо выяснить, не страдаете ли вы каким-либо душевным недугом...
Подходы к решению темы фильма: Существует три основных типа исторического фильма, имеющих между собой много общего...
Дисциплины:
2019-11-28 | 221 |
5.00
из
|
Заказать работу |
|
|
Необходимое оборудование и реактивы для синтеза РНК гидов
· Механические дозаторы на 10 и 20 мкл и наконечники к ним
· Микропробирки
· Термостат
· Амплификатор
· Настольная микроцентрифуга
· Набор Т7 для синтеза РНК (или отдельные компоненты: Т7 РНК полимераза с буфером, рибонуклеозидтрифосфаты, ДНКаза с буфером)
· Набор для выделения РНК (CleanRNA standard, Euro Gene, или другой аналогичный)
Реактивы и оборудование для расщепления ДНК
· Механические дозаторы на 10 и 20 мкл и наконечники к ним
· Микропробирки
· Термостат
· Настольная микроцентрифуга
· Спектрофотометр
· Вода без нуклеаз
· NEB буфер 3.1
· РНК-гид (на основе найденных спейсеров)
· Cas9 нуклеаза
· ДНК-субстрат
· Протеиназа К
Оборудование и реактивы для проведения электрофореза в агарозном геле
Необходимое оборудование и реактивы для ПЦР с геномной ДНК Streptococcus pyogenes phage 315.3
· ДНК-матрица исследуемого вируса
· 8 праймеров (форвард и реверс) (табл. 1)
· ПЦР Буфер
· Дезоксинуклеозидтрифосфаты (дНТФ или dNTP)
· Полимераза
· Стерильная вода
· Механические дозаторы 20 мкл, 200 мкл и 1 мл и наконечники к ним
· Микропробирки для амплификатора
· Амплификатор
Необходимое оборудование и реактивы для электрофореза в агарозном геле:
· Агароза
· TAE-буфер однократный
· Бромистый этидий
· Буфер с красителем для нанесения проб на гель
· ДНК-маркер
· Механический дозатор 20 мкл, наконечники
· Столик для заливки агарозного геля
· Рамка и гребенки для заливки агарозного геля
· СВЧ-печь
· Камера и источник питания для проведения электрофореза
· Трансиллюминатор.
· Табл. 1. Праймеры, используемые для определения наличия или отсутствия фрагментов ДНК фага после рестрикции исследуемыми Сas9-sg RNA комплексами.
|
№ | Фрагмент ДНК фага | Праймер |
1 | Определение фрагмента рестрикции Cas9-sg-RNA на основе Streptococcus pyogenes GCF_001635895 спейсер 5(846495-846560) TTAGAGGCCTATTTCACAGACAAAGACATC Реплицируемый фрагмент: CAGGAGCGGAAGACGGCTTACCTAAAATGCAAGTTATCGAAGCTAGTAAAGCGACGGGGATACTTGACCCAACTACATTTTTATTAACAGAGGGTTATGCAATTTTAGAGTCTGACTCAAACGGTAATCCTACGTTAGAGGCCTATTTCACAGACAAAGACATCTGGTATTATCCAAAAAAAGGGAAACCATATAATATTAAAAATCCAACAGGTCACCCCTTGCTTGTACCTATCATTCACAGACCAGACGCAGTTAGACCATTTGGTCGCAGTCGCATTACCAAGGCTGGAATGTATC | Прямой: AAAGCGACGGGGATACTTGA Обратный: CTGCGTCTGGTCTGTGAATG |
2 | Определение фрагмента рестрикции Cas9-sg-RNA на основе Streptococcus pyogenes GCF_001635895 спейсер 9(1222847 -1222912) ACTAGATTCGCCTCACGCTCTCCTCGCCAAATTT Реплицируемый фрагмент: CTGTGTTAGAATGGACCGCTAAAGGGGTTGATAGCCTTGCGGACCGTATTATTTTCAGGGAGTTTACCAACGATGATTTTAATGCTTGGGAAATTTTTAAAGCGAATAACCCTGATATCTTTTTTGATACAGCCATACAGTCAGCATTAATTGCATCTTGTTGCTTTGTGTACATCATGCCAGGAGCGGAAGACGGCTTACCTAAAATGCAAGTTATCGAAGCTAGTAAAGCGACGGGGATACTTGACCCAACTACATTTTTATTAACAGAGGGTTATGCAATTTTAGAGTCTGACTCAA | Прямой: AGCCTTGCGGACCGTATTAT Обратный: TCAAGTATCCCCGTCGCTTT |
3 | Определение фрагмента рестрикции Cas9-sg-RNA на основе Streptococcus pyogenes GCF_001635975 спейсер 3(790897-790962) TAGAGGCCTATTTCACAGACAAAGACATC Реплицируемый фрагмент: CAGGAGCGGAAGACGGCTTACCTAAAATGCAAGTTATCGAAGCTAGTAAAGCGACGGGGATACTTGACCCAACTACATTTTTATTAACAGAGGGTTATGCAATTTTAGAGTCTGACTCAAACGGTAATCCTACGTTAGAGGCCTATTTCACAGACAAAGACATCTGGTATTATCCAAAAAAAGGGAAACCATATAATATTAAAAATCCAACAGGTCACCCCTTGCTTGTACCTATCATTCACAGACCAGACGCAGTTAGACCATTTGGTCGCAGTCGCATTACCAAGGCTGGAATGTATC | Прямой: AAAGCGACGGGGATACTTGA Обратный: CTGCGTCTGGTCTGTGAATG |
4 | Определение фрагмента рестрикции Cas9-sg-RNA на основе Streptococcus pyogenes GCF_001020185 спейсер 3(1100792-1100857) GGAAAGCAGGAGAAAGGACGTTAATATGTC Реплицируемый фрагмент: TTGCGCACTGGATTTGTTACACAACGAAGCCAAAAAGAAAGCAAAGAACCAGCTGTTAAAAAACGACATCCGAAAGGGTGTTTTTTTACTGCTAAAAAATCTACCGAACTGCCGGGAAAGCAGGAGAAAGGACGTTAAATGTCAGAATTTAAAGTTATTGAAACACAAGAAGAGTTGGACACGATTGTGAAAGCTCGCATTGCTCGAGAACGTGAGAAATATCAAGATTACGACCAACTGAAAACTCGTGTTGAAGAACTAGAAACCGAAAACAGCAGCTTACAAACTGCTTTGATGA | Прямой: GGAAAGCAGGAGAAAGGACG Обратный: AGCTGCTGTTTTCGGTTTCT |
|
|
Типы оградительных сооружений в морском порту: По расположению оградительных сооружений в плане различают волноломы, обе оконечности...
Своеобразие русской архитектуры: Основной материал – дерево – быстрота постройки, но недолговечность и необходимость деления...
Состав сооружений: решетки и песколовки: Решетки – это первое устройство в схеме очистных сооружений. Они представляют...
Историки об Елизавете Петровне: Елизавета попала между двумя встречными культурными течениями, воспитывалась среди новых европейских веяний и преданий...
© cyberpedia.su 2017-2024 - Не является автором материалов. Исключительное право сохранено за автором текста.
Если вы не хотите, чтобы данный материал был у нас на сайте, перейдите по ссылке: Нарушение авторских прав. Мы поможем в написании вашей работы!