Использование ПЦР в диагностике инфекционных болезней.

Это метод выявления возбудителя в исследуемом материале по его ДНК. Поскольку ДНК каждого инфекционного агента является уникальной, то анализ точно определяет возбудителя и позволяет диагностировать практически все инфекции. Теоретически для этого достаточно наличия 1 ДНК в материале, поэтому ПЦР-диагностика эффективна и при вяло протекающих инфекциях с малым количеством возбудителя в материале. Для проведения ПЦР-исследования подходят практически любые материалы: отделяемое из половых путей, кровь, мазок из шейки матки, моча, соскоб из мочеиспускательного канала. Результат получают через 1-2 дня. В связи стем, что метод обнаруживает ДНК даже мертвых клеток, течение пары месяцев после пройденного лечения может быть получен ложноположительный результат, поскольку в этот период ДНК мертвых возбудителей могут содержаться в тканях пациента. Чувствительность метода значительно превосходит таковую у иммунохомических и микробиологических методов, а принцип метода позволяет диагностировать наличие инфекций со значительной антигенной изменчивостью. Специфичность ПЦР при использовании технологии PCR даже для всех вирусных, хламидийных, микоплазменных, уреаплазменных и большинства других бактериальных инфекций достигает 100%. Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов. ПЦР-диагностика обнаруживает наличие возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) это сделать невозможно. Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях. Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внешней среды (вода, почва и т. д.). В урологической и гинекологической практике - для выявления хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, герпеса, гарднереллёза, микоплазменной инфекции, ВПЧ - вирусов папилломы человека; в пульмонологии - для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний, туберкулёза; в гастроэнтерологии - для выявления хеликобактериоза; в клинике инфекционных заболеваний - в качестве экспресс-метода диагностики сальмонеллёза, дифтерии, вирусных гепатитов В, С и G; в гематологии - для выявления цитомегаловирусной инфекции, онковирусов.

Экспресс-методы диагностики инфекционных болезней.

Основными современными методами экспресс-диагностики возбудителей являются иммунологические и молекулярные методы детекции. В основе молекулярных методов лежит амплификация короткого участка ДНК или РНК, уникального для целевого возбудителя. Этот участок-мишень распознается с помощью специфических олигонуклеотидных праймеров (затравок) и многократно копируется (амплифицируется) комплексом ферментов. Одним из наиболее распространенных методов амплификации является полимеразная цепная реакция (ПЦР). Экспресс-методы, основанные на иммунологических реакциях, направлены на поиск в исследуемом материале специфических антигенов микроорганизмов (белков, гликопротеидов, липопротеидов, гликолипидов). Наиболее распространенным методом иммунодиагностики является иммуноферментный анализ (ИФА). ПЦР и ИФА, обладая несомненными преимуществами, такими как относительная простота выполнения, быстрота и объективность (за счет автоматизации учета результатов), тем не менее имеют ряд недостатков, что не позволяет полностью заменить ими бактериологический метод. Следует отметить, что обнаружение антигенов или ДНК патогенных микроорганизмов в исследуемом материале не дает информации об их жизнеспособности, так как указанные соединения будут определяться и после гибели клеток.