Кормораздатчик мобильный электрифицированный: схема и процесс работы устройства...
Поперечные профили набережных и береговой полосы: На городских территориях берегоукрепление проектируют с учетом технических и экономических требований, но особое значение придают эстетическим...
Топ:
Методика измерений сопротивления растеканию тока анодного заземления: Анодный заземлитель (анод) – проводник, погруженный в электролитическую среду (грунт, раствор электролита) и подключенный к положительному...
Теоретическая значимость работы: Описание теоретической значимости (ценности) результатов исследования должно присутствовать во введении...
Комплексной системы оценки состояния охраны труда на производственном объекте (КСОТ-П): Цели и задачи Комплексной системы оценки состояния охраны труда и определению факторов рисков по охране труда...
Интересное:
Финансовый рынок и его значение в управлении денежными потоками на современном этапе: любому предприятию для расширения производства и увеличения прибыли нужны...
Подходы к решению темы фильма: Существует три основных типа исторического фильма, имеющих между собой много общего...
Искусственное повышение поверхности территории: Варианты искусственного повышения поверхности территории необходимо выбирать на основе анализа следующих характеристик защищаемой территории...
Дисциплины:
2017-09-30 | 362 |
5.00
из
|
Заказать работу |
|
|
Ингредиенты реакции: исследуемая сыворотка для выявления антител к поверхностным антигенам (гликопротеинам) ВИЧ,лунки планшеток с сорбированным ВИЧ антигеном , антиглобулиновая сыворотка, меченная ферментом (пероксидазой хрена) и субстрат/хромоген для фермента (перекись водорода + ортофенилендиамин — ОФД)
Постановка ИФА: В лунки планшетокс сорбированным ВИЧ антигеном добавляют исследуемую сыворотку больного. Выдерживают 60 мин. при комнатной температуре и промывают каждую лунку буферным раствором для удаления несвязанных компонентов. В каждую лунку вносят антиглобулиновую сыворотку, меченную ферментом (пероксидазой хрена). Выдерживают 60 мин при комнатной температуре и промывают каждую лунку буферным раствором для удаления несвязанных компонентов. Затем добавляют субстрат/хромоген для фермента (перекись водорода + ортофенилендиамин — ОФД).
Учёт ИФА. При образовании комплекса + + , субстрат (перекись водорода) расщепляется ферментом (пероксидазой хрена) на конечные продукты кислород и воду. В присутствии кислорода индикатор (ОФД) изменяет цвет продукта реакции — с бесцветного на желто-коричневый. Интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител. Определяют оптическую плотность содержимого каждой лунки (контрольных и рабочих) с помощью фотоколориметра.
1. Определение специфичности контролей: контроли специфичны, если
ОП «+» контролей >1, а ОП «-»<0,2.
2. Расчет ОП критической
ОП крит. = ср. знач. ОП К- + 0,200
где ОП крит.- критическое значение оптической плотности; ср. знач. ОП К--- среднее значение оптической плотности отрицательных контролей; 0,200 — коэффициент, устанавливаемый методом статистической обработки результатов на предприятии-изготовителе тест-системы.
|
3. Определение результата реакции:
результат положительный, если ОП рабочей лунки > ОП крит.,
результат отрицательный, если ОП рабочей лунки < ОП крит.
Заключение: Например, контроли специфичны и результат положительный, следовательно, в исследуемой сыворотке содержатся антитела к ВИЧ.
Зарисовать схему молекулярной гибридизации (МГ)
Метод молекулярной гибридизации ДНК-ДНК используется для установления геномного родства в пределах рода и семейств микроорганизмов; РНК-ДНК на уровне порядка. Степень сходства или гомологичность последовательностей ДНК выражается процентом (%) гомологии и является мерой геномного родства микроорганизмов.
Схема точечной гибридизации
Недостаток метода — короткий период полураспада фосфора и наличие специфического оборудования.
Блот-гибридизация
Метод выявления фрагментов ДНК, разделенных электрофорезом в агарозе. ДНК предварительно нарезается с помощью рестрикционных эндонуклеаз из суммарной ДНК. Перенос фрагментов ДНК на нитроцеллюлозные фильтры и обработка мечеными зондами.
|
Гибридизация in situ
Позволяет выявить нуклеиновые кислоты в инфицированных клетках. Клетки, после денатурации нуклеиновой кислоты, обрабатываются немечеными зондами, формирующими гибридные двунитчатые структуры, затем обработка меченой флюорохромом сывороткой к гибридомам. При наличии в материале незначительных количеств нуклеиновой кислоты вирусов применяется ПЦР.
|
|
Папиллярные узоры пальцев рук - маркер спортивных способностей: дерматоглифические признаки формируются на 3-5 месяце беременности, не изменяются в течение жизни...
История создания датчика движения: Первый прибор для обнаружения движения был изобретен немецким физиком Генрихом Герцем...
Типы сооружений для обработки осадков: Септиками называются сооружения, в которых одновременно происходят осветление сточной жидкости...
Адаптации растений и животных к жизни в горах: Большое значение для жизни организмов в горах имеют степень расчленения, крутизна и экспозиционные различия склонов...
© cyberpedia.su 2017-2024 - Не является автором материалов. Исключительное право сохранено за автором текста.
Если вы не хотите, чтобы данный материал был у нас на сайте, перейдите по ссылке: Нарушение авторских прав. Мы поможем в написании вашей работы!