Состав сооружений: решетки и песколовки: Решетки – это первое устройство в схеме очистных сооружений. Они представляют...
Особенности сооружения опор в сложных условиях: Сооружение ВЛ в районах с суровыми климатическими и тяжелыми геологическими условиями...
Топ:
Методика измерений сопротивления растеканию тока анодного заземления: Анодный заземлитель (анод) – проводник, погруженный в электролитическую среду (грунт, раствор электролита) и подключенный к положительному...
История развития методов оптимизации: теорема Куна-Таккера, метод Лагранжа, роль выпуклости в оптимизации...
Интересное:
Лечение прогрессирующих форм рака: Одним из наиболее важных достижений экспериментальной химиотерапии опухолей, начатой в 60-х и реализованной в 70-х годах, является...
Отражение на счетах бухгалтерского учета процесса приобретения: Процесс заготовления представляет систему экономических событий, включающих приобретение организацией у поставщиков сырья...
Финансовый рынок и его значение в управлении денежными потоками на современном этапе: любому предприятию для расширения производства и увеличения прибыли нужны...
Дисциплины:
2017-06-09 | 432 |
5.00
из
|
Заказать работу |
|
|
При вирусных заболеваниях РСК ставят по общепринятой методике с учетом ряда особенностей. В реакции участвует две системы: специфическая (испытуемый антиген + специфическая сыворотка) и индикаторная (гемолитическая сыворотка + взвесь эритроцитов барана).
Связывающим компонентом между ними является комплемент. Результаты будут зависеть от того, в какой системе принимает участие комплемент. Если испытуемый антиген гомологичен антителам, находящимся в специфической сыворотке, то образуется комплекс антиген + антитело, связывающий весь комплемент. При отсутствии комплемента в индикаторной системе изменений не наступит (задержка гемолиза). Если антиген не соответствует антителам, в этом случае комплемент остается свободным, так как комплекс не образуется. При наличии свободного комплемента в индикаторной системе наступит гемолиз эритроцитов.
Компоненты РСК
1. Гемолизин (гемолитическая сыворотка крови кроликов, содержащая антитела-гемолизины, вызывающие вместе с комплементом гемолиз эритроцитов барана),
2. Эритроциты барана (2 %-ная взвесь отмытых эритроцитов барана на физиологическом растворе).
3. Комплемент (сухая или нативная сыворотка крови морских свинок)
4. Испытуемый антиген (инактивированная вирусосодержащая суспензия из афтозного
материала).
5. Контрольные стандартные антигены основных типов и вариантов.
6. Стандартные типоспецифические сыворотки.
7. Физиологический раствор.
Если РСК ставят в объеме 1 мл, то каждый компонент берут в количестве 0,2 мл, если в объеме 0,5 мл - по 0,1 мл. При постановке РСК микрометодом с помощью аппарата Такачи или титротек, объем каждого компонента составляет 0,025 мл.
|
Последовательность постановки РСК:
1 Титрация гемолизина
2 Подготовка гемсистемы.
3 Титрация комплемента.
4 Разведение стандартных типоспецифических ящурных сывороток и антигенов до рабочих титров.
5 Разлив стандартных сывороток, антигенов и физраствора по 0,2мл.
6 Разлив комплемента по 0,2 мл в рабочем титре.
7 Водяная баня 20 мин. при 37°С.
8 Разлив гемсистемы по 0,4 мл.
9 Водяная баня 30 мин. при 37°С.
10 Учет результатов после бани.
11 Учет результатов через 14-15 часов.
Титрование гемолизина
Титр гемолизина - наименьшее его количество, необходимое для полного гемолиза соответствующего объема 2 %-ной взвеси эритроцитов барана в присутствии комплемента, разведенного 1:20.
В РСК используют биофабричный гемолизин, консервированный глицерином 1:1. Поэтому для приготовления основного разведения 1:100 берут 0,2 мл гемолизина и 9,8 мл физраствора. Чтобы приготовить разведение 1:1000, берут 1 мл гемолизина, разведенного 1:100, и 9 мл физраствора. Затем необходимые разведения гемолизина готовят по схеме.
Компоненты | Разведение гемолизина | ||||||||
1:1500 | 1:2000 | 1:3000 | 1:4000 | 1:5000 | 1:6000 | 1:7000 | |||
Гемолизин 1:1000 (мл) | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | ||
Физиологический раствор (мл) | 0,5 | 1,0 | 2,0 | 3,0 | 4,0 | 5,0 | 6,0 | ||
Полученные разведения гемолизина по 0,5 мл используют при определении его титра.
Схема титрования гемолизина
Компоненты | Разведение гемолизина | ||||||
1:1000 | 1:1500 | 1:2000 | 1 3000 | 1-4000 | 1:5000 | 1:6000 | |
Гемолизин | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
Физ. раствор | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 |
Комплемент 1:20 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
Эритроциты | |||||||
(2% взвесь) | 0,5 | 0,5 | 0.5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
Водяная баня 10 мин, при 37°С | |||||||
Учет | - | - | - | - | ++ | +++ |
Согласно схеме, титр гемолизина составляет его разведение 1:3000, но в главный опыт берут гемолизин в четырехкратной концентрации, т. е. разведение 1:750, а так как он консервирован глицерином (1:1), то для приготовления рабочего раствора берут двойную дозу 2:750 или 0,2 мл цельного гемолизина и 74,8 мл физиологического раствора.
|
При титровании гемолизина и комплемента ставят следующие контроли:
1 Контроль эритроцитов (0,5 мл 2 %-ной взвеси эритроцитов + 2 мл физраствора).
2 Контроль гемолизина (0.5 мл 1:1000 гемолизина -I- 0,5 мл 2 %-ной взвеси эритроцитов + 1,5 мл физраствора).
3 Контроль комплемента (0,5 мл 1:20 комплемента + 0.5 мл 2 %-ной взвеси эритроцитов + 1,5мл физраствора).
4 Контроль гемсистемы (0,5 мл 1:1000 гемолизина + 0,5 мл 1:20 комплемента + 1,0 мл физраствора).
В первых трех контролях должна быть задержка в последнем - гемолиз.
Приготовление гемолитической системы
Дефибрированные эритроциты барана отмывают физиологическим раствором с помощью центрифуги. Из осадка готовят 2%-ную взвесь на физиологическом растворе, которую размешивают в равном объеме с гемолизином в рабочем титре. Перед использованием гемолитическую систему выдерживают в термостате при 37°С 30 мин.
Титрование комплемента
Комплемент титруют в гомологической системе в день постановки реакции.
За титр комплемента принимают наименьшее его количество, необходимое для гемолиза соответствующего объема 2%-ной взвеси эритроцитов барана в присутствии гемолизина в рабочем титре.
|
|
Адаптации растений и животных к жизни в горах: Большое значение для жизни организмов в горах имеют степень расчленения, крутизна и экспозиционные различия склонов...
Эмиссия газов от очистных сооружений канализации: В последние годы внимание мирового сообщества сосредоточено на экологических проблемах...
Типы оградительных сооружений в морском порту: По расположению оградительных сооружений в плане различают волноломы, обе оконечности...
Опора деревянной одностоечной и способы укрепление угловых опор: Опоры ВЛ - конструкции, предназначенные для поддерживания проводов на необходимой высоте над землей, водой...
© cyberpedia.su 2017-2024 - Не является автором материалов. Исключительное право сохранено за автором текста.
Если вы не хотите, чтобы данный материал был у нас на сайте, перейдите по ссылке: Нарушение авторских прав. Мы поможем в написании вашей работы!