Качественное и количественное определение липазы панкреатического сока, диагностическое значение.

Работа позволяет качественно обнаружить наличие липазы в панкреатическом соке и дать количественную оценку ее действия.

Принцип метода. Метод основан на нейтрализации щелочью жирных кислот, образующихся при гидролизе жира ферментом липазой. Активность липазы определяется так называемым “липазным числом”, т.е. количеством мл 0,1н раствора КОН, идущего на нейтрализацию свободных жирных кислот, образующихся в результате гидролиза жира молока под влиянием 1 мл ферментного раствора (панкреатического сока).

Ход работы. Отмерить в 2 пробирки по 4 мл молока, 5-8 капель фенолфталеина и добавить одинаковое количество 0,1н раствора КОН до появления красной окраски (щелочь нейтрализует всю кислотность молока).

После этого в одну пробирку добавить 2 мл предварительно прокипяченного панкреатического сока, в другую - некипяченого. Обе пробирки сверху залить 0,5 мл толуола для защиты от поглощения СО2 и поместить в термостат при 38°С на 30 мин. По истечении указанного времени пробирки вынуть, охладить и отметить обесцвечивание в пробирке с активным ферментом (щелочь нейтрализуется образующимся в результате гидролиза органическими кислотами). Содержимое этой пробирки оттитровать 0,1н раствором КОН до одинаковой окраски со второй пробиркой.

Расчет. Для определения липазного числа надо количество мл 0,1н раствора КОН, пошедшего на титрование, разделить на 2, т.е. на число мл ферментного раствора (панкреатического сока), взятого в опыт.

5. Особенности всасывания и транспорта липидов в крови организма человека. Роль ЛПЛ и её связь с гепарином.

Образование хиломикронов и транспорт липидов. Ресинтезированные в эпителиальных клетках кишечника триглицериды и фосфолипиды, а также поступивший в эти клетки из полости кишечника холестерин (здесь он может частично эстерифицироваться) соединяются с небольшим количеством белка и образуют относительно стабильные комплексные частицы – хиломикроны (ХМ). Последние содержат около 2% белка, 7% фосфолипидов, 8% холестерина и его эфиров и более 80% триглицеридов. Диаметр ХМ колеблется от 0,1 до 5 мкм. Благодаря большим размерам частиц ХМ не способны проникать из эндотелиальных клеток кишечника в кровеносные капилляры и диффундируют в лимфатическую систему кишечника, а из нее – в грудной лимфатический проток. Затем из грудного лимфатического протока ХМ попадают в кровяное русло, т.е. с их помощью осуществляется транспорт экзогенных триглицеридов, холестерина и частично фосфолипидов из кишечника через лимфатическую систему в кровь. Уже через 1–2 ч после приема пищи, содержащей жиры, наблюдается алиментарная гиперлипемия. Это физиологическое явление, характеризующееся в первую очередь повышением концентрации триглицеридов в крови и появлением в ней ХМ. Пик алиментарной гиперлипемии наблюдается через 4–6 ч после приема жирной пищи. Обычно через 10–12 ч после приема пищи содержание триглицеридов возвращается к нормальным величинам, а ХМ полностью исчезают из кровяного русла.

Липопротеинлипаза (ЛПЛ) — фермент эндотелия капилляров разных органов, гидролизующий липиды хиломикронов и ЛПОНП и таким образом способствующий включению жирных кислот триацилглицеролов в ткани. Этот фермент обнаружен в сердечной мышце, аорте, лактирующей молочной железе. Фосфолипиды и один из апобелков липопротеинов (Апо-С-П) являются кофакторами ЛПЛ, способствуя его связыванию с субстратом (липопротеином). Таким образом, ХМ и ЛПОНП обеспечивают фермент, локализованный на стенках капилляров и катализирующий их метаболизм как субстратом, так и кофакторами. В процессе гидролиза триацилгли- церол превращается вначале в диацилглицерол, а затем в моноацилглицерол, который расщепляется на глицерол и свободную жирную кислоту. Часть жирных кислот поступает в кровоток, где они связываются с альбумином крови и транспортируются в другие органы, а основная масса жирных кислот интегрируется в ткань.

6) Мобилизация жира в жировых депо. Тканевые липазы. Гормоны, стимулирующие липолиз. Механизм стимуляции липолиза адреналином.

Тканевые липазы. Гормоны, стимулирующие липолиз